Se fotografiaron brotes, barra de escala: 100 µm – Genómica, Proteómica y Bioinformática

Se fotografiaron los brotes, barra de escala: 100?m. la inducción de la expresión de p53 con inhibidores de molécula pequeña de la unión de p53-MDM2 (MI-773, APG-115) fue suficiente para inhibir la diferenciación vasculogénica inducida por VEGF. Teniendo en cuenta que p21 es un importante efector aguas abajo de p53, derribamos p21 en DPSC y observamos un aumento en la brotación capilar que imitaba los resultados observados cuando se derribaba p53. La estabilización de la actividad de la ubiquitina fue suficiente para inducir la expresión de p53 y p21 y reducir la brotación capilar. Curiosamente, observamos una correlación inversa y recíproca entre p53/p21 y la expresión de Bmi-1, un importante regulador de la autorrenovación SIBA de células madre. Además, la inhibición directa de Bmi-1 con PTC-209 resultó en el bloqueo de la formación de brotes de tipo capilar. Colectivamente, estos datos demuestran que p53/p21 funciona a través de Bmi-1 para prevenir la diferenciación vasculogénica de DPSC. prueba. f Las células DPSC se sembraron en matrigel y se cultivaron con EGM2 durante 8 días. El Matrigel se fijó y los brotes se revelaron mediante tinción IF para CD31. Barra de escala: 100?m. g En total, se sembraron 1??104 DPSC transducidas con shRNA en una placa de 12 pocillos recubierta con matrigel y factor de crecimiento reducido y se cultivaron en medio de diferenciación endotelial (EGM2) durante los puntos de tiempo indicados. Se fotografiaron los brotes, barra de escala: 100 µm. h Gráfico que representa el número de brotes creados en g. Se realizaron tres experimentos independientes utilizando pocillos por triplicado por condición. Asterisk muestra un modelo de ratón de vasculogénesis derivada de DPSC humana Se generaron vasos sanguíneos humanos derivados de DPSC en ratones inmunodeficientes bajo un protocolo autorizado por UCUCA (PRO00009087), como se explica [33]. En resumen, se realizaron andamios de ácido poli-l (láctico) altamente poroso (Boehringer Ingelheim; Ingelheim, Alemania) (prueba o ANOVA unidireccional seguido de verificaciones post hoc apropiadas utilizando el software SigmaStat 4.0 (SPSS; Chicago, IL, EE. UU.) . Los gráficos representan la desviación estándar media a lo largo del manuscrito. Los tamaños de las muestras fueron para estudios in vitro e in vivo y se determinaron mediante cálculos de potencia utilizando datos publicados en publicaciones anteriores (o comprobaciones piloto) como investigación. La variación entre organizaciones estuvo relativamente relacionada en los estudios incluidos aquí. La significación estadística se identificó en emp /em ? 0,05. Información complementaria Material complementario (12M, pdf) Tabla complementaria 1 (17K, docx) Tabla complementaria 2 (18K, docx) Agradecimientos Los autores agradecen a Kristy Warner por su asistencia técnica y ayuda a lo largo de este proyecto. Los autores también agradecen a Songtao Shi (Universidad o colegio de Pensilvania) por el regalo de DPSC, y Shaomeng Wang por el MI-773 y APG-115 utilizados en este estudiar. Contribuciones de los autores ZZ concibió el estudio, contribuyó a la adquisición, el análisis y la interpretación de los datos, y redactó el manuscrito; MO, JIS, contribuyó a la adquisición de datos y revisó críticamente el manuscrito; JEN concibió el estudio, contribuyó al análisis y la interpretación de los datos, editó el manuscrito. Todos los autores ofrecieron la autorización final y acordaron hacerse responsables de todos los aspectos del trabajo. Financiamiento Este trabajo fue financiado por la subvención RO1-“type”:”entrez-nucleótido”,”attrs”:”text”:”DE021410″,”term_id”:”62264880″,”term_text”:”DE021410″DE021410 de su NIH /NIDCR (JEN). Disponibilidad de datos Los datos que respaldan los hallazgos de este estudio están disponibles a través de su autor de correspondencia previa solicitud razonable. Conflicto de intereses Los autores declaran que no hay conflictos de intereses. Notas al pie Editado por D. Aberdam. Los editores notan que Springer Nature se mantiene neutral con respecto a las declaraciones jurisdiccionales en mapas publicados y afiliaciones institucionales. Información complementaria La versión en línea contiene material complementario disponible en 10.1038/s41419-021-03925-z..f Se sembraron células DPSC en matrigel y se cultivaron con EGM2 durante 8 días. DPSC sembradas en andamios biodegradables y trasplantadas en ratones inmunodeficientes generaron vasos sanguíneos humanos maduros revestidos con células murales actina positivas de masa muscular lisa. La inactivación de p53 fue adecuada para inducir la diferenciación vasculogénica de DPSC (sin un medio de diferenciación vasculogénica que comprendiera VEGF), como se demostró por una mayor manifestación de marcadores endoteliales (VEGFR2, Tie-2, CD31, VE-cadherina), mejor crecimiento capilar in vitro; y densidad de vasos sanguíneos derivada de DPSC mejorada in vivo. Por el contrario, la inducción de la manifestación de p53 con inhibidores de molécula pequeña de la unión de p53-MDM2 (MI-773, SIBA APG-115) fue adecuado para inhibir la diferenciación vasculogénica inducida por VEGF. Teniendo en cuenta que p21 es un importante efector aguas abajo de p53, derribamos p21 en DPSC y observamos un aumento en la brotación capilar que imitaba los resultados observados cuando se derribaba p53. La estabilización de la actividad de la ubiquitina SIBA fue adecuada para inducir la manifestación de p53 y p21 y reducir la brotación capilar. Curiosamente, observamos una correlación inversa y recíproca entre p53/p21 y la manifestación de Bmi-1, un importante regulador de la autorrenovación de células madre. Además, la inhibición directa de Bmi-1 con PTC-209 resultó en el bloqueo de la formación de brotes de tipo capilar. Colectivamente, estos datos demuestran que p53/p21 funciona a través de Bmi-1 para prevenir la diferenciación vasculogénica de DPSC. prueba. f Las células DPSC se sembraron en matrigel y se cultivaron con EGM2 durante 8 días. El Matrigel se fijó y los brotes se expusieron mediante tinción IF para CD31. Escala pub: 100?m. g En total, se sembraron 1??104 DPSC transducidas con shRNA en una placa de 12 pocillos recubierta con matrigel y factor de crecimiento reducido y se cultivaron en medio de diferenciación endotelial (EGM2) durante los puntos de tiempo indicados. Se fotografiaron brotes, escala pub:100?m. h Gráfico que representa el número de brotes creados en g. Se realizaron tres experimentos autónomos utilizando pocillos por triplicado por condición. Asterisk muestra un modelo de ratón de vasculogénesis derivada de DPSC humana Se generaron vasos sanguíneos humanos derivados de DPSC en ratones inmunodeficientes bajo un protocolo autorizado por UCUCA (PRO00009087), como se explica [33]. En resumen, se realizaron andamios de ácido poli-l (láctico) altamente poroso (Boehringer Ingelheim; Ingelheim, Alemania) (prueba o ANOVA unidireccional seguido de verificaciones post hoc apropiadas utilizando el software SigmaStat 4.0 (SPSS; Chicago, IL, EE. UU.) . Los gráficos representan la desviación estándar media a lo largo del manuscrito. Los tamaños de las muestras fueron para estudios in vitro e in vivo y se determinaron mediante cálculos de potencia utilizando datos publicados en publicaciones anteriores (o comprobaciones piloto) como investigación. La variación entre organizaciones estuvo relativamente relacionada en los estudios incluidos aquí. La significación estadística se identificó en emp /em ? 0,05. Información complementaria Material complementario (12M, pdf) Tabla complementaria 1 (17K, docx) Tabla complementaria 2 (18K, docx) Agradecimientos Los autores agradecen a Kristy Warner por su asistencia técnica y ayuda a lo largo de este proyecto. Los autores también agradecen a Songtao Shi (Universidad o colegio de Pensilvania) por el regalo de DPSC, y Shaomeng Wang Policlonal de conejo a STAT1 (fosfo-Ser727) para el MI-773 y APG-115 utilizados en este estudio. Contribuciones de los autores ZZ concibió el estudio, contribuyó a la adquisición, el análisis y la interpretación de los datos, y redactó el manuscrito; MO, JIS, contribuyó a la adquisición de datos y revisó críticamente el manuscrito; JEN concibió el estudio, contribuyó al análisis y la interpretación de los datos, editó el manuscrito. Todos los autores ofrecieron la autorización final y aceptaron ser responsables de todos los aspectos del trabajo. Financiamiento Este trabajo fue financiado por la subvención RO1-“type”:”entrez-nucleótido”,”attrs”:”text”:”DE021410″,”term_id”:”62264880″,”term_text”:”DE021410″DE021410 de su NIH /NIDCR (JEN). Disponibilidad de datos Los datos que respaldan los hallazgos de este estudio están disponibles a través de su autor de correspondencia previa solicitud razonable. Conflicto de intereses Los autores declaran que no hay conflictos de intereses. Notas al pie Editado por D. Aberdam. Los editores notan que Springer Nature se mantiene neutral con respecto a las declaraciones jurisdiccionales en mapas publicados y afiliaciones institucionales. Información complementaria La versión en línea contiene material complementario disponible en 10.1038/s41419-021-03925-z..

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