Método de detección del virus de la peste porcina africana

La peste porcina africana (PPA) es una enfermedad infecciosa contagiosa causada por el virus de la peste porcina africana (ASFV) que se propaga solo entre los cerdos domésticos y los jabalíes, con un inicio rápido, un curso corto de la enfermedad y una tasa de mortalidad del 100%. Este artículo resume los últimos avances en la tecnología de detección de la PPA, con el fin de proporcionar una referencia para el diagnóstico eficiente de la PPA. Aislamiento del virus de la peste porcina africana y ensayo de adsorción de eritrocitos porcinos El aislamiento del virus de la peste porcina africana combinado con el ensayo de adsorción de eritrocitos porcinos (HAD) es uno de los estándares de oro para la detección recomendados por la OIE, y un resultado positivo de la prueba HAD se reconoce como un factor decisivo en el diagnóstico de la infección por peste porcina africana . Sin embargo, debido a los altos requisitos de estándares técnicos de las células cultivadas primarias para el proceso de detección, esta técnica es propensa a falsos negativos durante la operación y la reacción de detección lleva mucho tiempo. Actualmente, se suele utilizar como diagnóstico auxiliar para otros métodos de detección. Métodos de detección basados ​​en biología molecular El genoma de ASFV tiene aproximadamente 170-194 kb y codifica más de 150 genes potenciales. El método de detección por biología molecular de la peste porcina africana se basa principalmente en la secuencia genética conservada y específica del virus de la peste porcina africana, y analiza y detecta el fragmento de la secuencia diana mediante la amplificación genética específica. Los métodos de detección biológica molecular son los preferidos por el personal de detección debido a sus características precisas y eficientes. Los métodos comúnmente utilizados son: reacción en cadena de la polimerasa (PCR), PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR), PCR digital de gotas, técnicas de amplificación isotérmica (LAMP, CPA y RPA), técnicas de amplificación isotérmica CRISPR y PCR multiplex (mPCR) .

Figura 1. Composición esquemática y estructura del virus de la peste porcina africana.

Métodos de detección basados ​​en serología

En base a sus ventajas de simplicidad, costo relativamente bajo y bajos requisitos de equipo especial, los métodos de diagnóstico serológico son actualmente uno de los métodos de prueba de diagnóstico comúnmente utilizados para el ASFV. La detección serológica del virus de la peste porcina africana incluye la detección de antígenos y la detección de anticuerpos, pero el método de detección de antígenos tiene requisitos más estrictos en cuanto a las condiciones de detección. Dado que actualmente no existe una vacuna comercializada contra el virus de la peste porcina africana, las personas infectadas no pueden neutralizar por completo los anticuerpos después de la infección por el virus de la peste porcina africana. Por lo tanto, un resultado positivo de la prueba de anticuerpos contra el virus de la peste porcina africana puede indicar directamente una infección por el virus. Sin embargo, algunos individuos afectados también El inicio es muy rápido y el paciente murió sin producir anticuerpos. Por lo tanto, los métodos de detección basados ​​en anticuerpos generalmente deben combinarse con otros métodos de detección para el diagnóstico.

Método de detección de anticuerpos

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)

ELISA es el método de detección serológica preferido para el virus de la peste porcina africana recomendado por la OIE. Su principio se basa en el método de detección indirecta establecido por la proteína estructural antigénica del VPPA como antígeno de recubrimiento. En los últimos años, se han desarrollado una variedad de diferentes ensayos recubiertos con antígeno.

Transferencia occidental

La transferencia Western utiliza principalmente la reacción específica de antígeno-anticuerpo para detectar la proteína objetivo de la mezcla de proteínas, para determinar cuantitativa o cualitativamente la existencia de la proteína objetivo en la muestra de prueba, esta tecnología integra tecnología serológica en comparación con el método de análisis de electroforesis de proteínas , tiene las características de alta sensibilidad.

Inmunocromatografía de oro coloidal (GICA)

En comparación con la tecnología ELISA, PCR o qRT-PCR recomendada por la OIE, la tecnología GICA tiene la ventaja de ser flexible y no estar limitada por los instrumentos de detección, y es muy adecuada para la detección rápida in situ. Recientemente, las tiras de prueba de diagnóstico de amplificación de cebador cruzado combinadas con tiras inmunocromatográficas y tiras de prueba de inmunooro han sido establecidas por investigaciones y tienen las características de diagnóstico rápido, fuerte sensibilidad y resultados precisos, y su efecto de detección de trazas también es muy obvio.

Método de detección de antígenos

Ensayo de anticuerpos fluorescentes (FAT)

FAT es uno de los métodos de detección de antígenos comúnmente utilizados y también es la tecnología de detección de ASFV recomendada por la OIE. Su principio es realizar la identificación del antígeno correspondiente en la muestra a analizar en base al anticuerpo marcado con sustancia fluorescente. Esta tecnología tiene las ventajas de rapidez, alta sensibilidad y fuerte especificidad. Un ELISA indirecto desarrollado por investigadores que utilizan inmunoensayos multiplex de perlas fluorescentes tiene una alta especificidad para la detección de aislamientos de ASFV de baja virulencia en áreas endémicas de ASFV.

Análisis inmunocromatográfico de flujo lateral (LFIA)

LFIA es una tecnología de inmunoensayo de membrana en fase sólida que combina tecnología de inmunomarcaje y tecnología cromatográfica. En los últimos años, el método de detección LFIA basado en el gen p72 del ASFV ha demostrado una alta especificidad, rapidez y fácil interpretación de los resultados de detección.

ELISA sándwich de doble anticuerpo (método ELISA-doble sándwich)

Las características técnicas del sándwich ELISA de doble anticuerpo son que después del reconocimiento de antígeno o anticuerpo en dos pasos, la reacción de color se expande por el antígeno indirecto marcado con enzima o sustrato catalizado por anticuerpo, y el análisis cualitativo o cuantitativo se lleva a cabo de acuerdo con la profundidad de color.

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