En un estudio reciente publicado en MÁS UNOlos investigadores compararon el uso de enjuagues bucales sin etanol y enjuagues bucales que contienen etanol para estudios de microbioma oral y evaluaron la estabilidad de las muestras de enjuague bucal durante ≤10 días antes del procesamiento.
Fondo
Las bacterias en la boca o la cavidad oral juegan un papel fundamental en la prevención de enfermedades humanas. Las muestras de la cavidad oral obtenidas con enjuagues bucales que contienen etanol se utilizan comúnmente en la investigación de la microbiota oral.
El etanol se usa comúnmente como solvente para sustancias activas y sabores, así como también como conservante debido a sus características antibacterianas. Sin embargo, el alcohol es combustible e inapropiado para transporte y almacenamiento a gran escala.
Las personas pueden abstenerse de usar enjuagues bucales que contengan etanol debido a la sensación de ardor asociada u otras preocupaciones médicas, personales, culturales y/o religiosas.
Además, las personas con contraindicaciones, como los alcohólicos actuales o en recuperación, las lesiones de la mucosa oral y las condiciones inmunosupresoras, deben evitar la exposición al etanol. Sin embargo, no está claro si son apropiados para las investigaciones de la microbiota oral.
Sobre el estudio
En el presente estudio, los investigadores compararon lavados orales obtenidos con enjuagues bucales con o sin etanol para el análisis de microbiomas. También investigaron si los enjuagues bucales eran estables durante ≤10,0 días para evaluar su sensibilidad al procesamiento retrasado.
El estudio incluyó a 40 voluntarios, 20 hombres y 20 mujeres, reclutados del Programa de Donantes de Investigación del Laboratorio Nacional de Investigación del Cáncer de Frederick para el análisis. Cada participante proporcionó dos muestras autoobtenidas de lavados bucales, uno con un enjuague bucal sin etanol y otro con un enjuague bucal que contenía etanol.
Las dos muestras se obtuvieron en días consecutivos, en los que el 50 % de los participantes proporcionaron muestras de enjuague bucal sin etanol el día inicial y muestras de enjuague bucal que contenían etanol el día siguiente, y viceversa para la mitad restante de los participantes del estudio. En el laboratorio, se crearon tres alícuotas de 3,0 mL cada una de todas las muestras.
Entre las alícuotas, una fue procesada inmediatamente y congelada, mientras que las otras dos alícuotas fueron almacenadas a 4◦C durante cinco días y a temperatura ambiente (22◦C) durante diez días para simular retrasos en el envío antes de la congelación. El equipo extrajo ácido desoxirribonucleico (ADN) después de la amplificación de la región variable 4 (V4) del gen del ácido ribonucleico ribosomal (ARNr) 16S mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la secuenciación de amplicones y el procesamiento mediante análisis bioinformático.
Los dos tipos de enjuagues bucales se compararon utilizando múltiples métricas de microbiota. Además, los participantes completaron cuestionarios para proporcionar datos sobre demografía, salud bucal, prácticas de higiene, salud bucal e historial reciente de uso de antibióticos.
Solo se incluyeron personas sanas de 40 a 65 años sin antecedentes de afecciones médicas crónicas, como enfermedades cardiovasculares, respiratorias, renales, hematológicas o infecciosas.
Además, las personas incluidas tenían una dentadura completa, trabajaban en el Laboratorio Nacional de Frederick o eran miembros de la comunidad de Fort Detrick y pesaban ≥110,0 libras. El enjuague bucal sin etanol contenía cloruro de cetilpiridinio (0,07 %), glicerina, agua, sabor, sacarina sódica, poloxámero 407, sucralosa, metilparabeno, Blue 1 y propilparabeno.
Los componentes del enjuague bucal que contenía etanol eran etanol (15% en peso), glicerina, agua, polisorbato 80, aroma, cloruro de cetilpiridinio, ácido benzoico, benzoato de sodio, amarillo 5, azul 1 y sacarina de sodio.
Resultados y conclusiones
La edad media de los participantes fue de 52,0 años; el 88% eran de raza blanca, el 90% documentó su estado de salud oral como bueno a excelente; 80% no documentó enfermedad gingival; El 55% eran completamente dentados y el 93% de los individuos habían informado caries. Entre los participantes, el 53% usó enjuagues bucales ≥1,0 veces por semana en el mes anterior a la obtención de las muestras.
Las métricas de microbiota fueron comparables para los dos tipos de enjuague bucal; los valores del coeficiente de correlación intraclase (ICC) estaban por encima de 0,85 para las métricas de diversidad alfa (α) y diversidad beta (β), independientemente del tipo de enjuague bucal.
Se observaron ICC elevados, por encima de 0,75, para los géneros más abundantes (Prevotella, Estreptococo, veillonella, gemellay Haemophilus) y fila (Patescibacterias, Firmicutes y Proteobacterias), sobre la comparabilidad de los dos tipos de enjuagues bucales.
Sin embargo, se observaron diferencias significativas en la abundancia de algunos taxones microbianos, en términos relativos, probablemente debido a las diferencias en la composición química de los enjuagues bucales. Además, ambos tipos de enjuague bucal fueron muy estables a pesar de los retrasos en el procesamiento, según las medidas de diversidad α y β y la abundancia de los 4,0 géneros y especies más numerosos, en términos relativos.
Los hallazgos indicaron que el rendimiento del enjuague bucal sin etanol fue comparable al del enjuague bucal que contiene etanol en la recolección de lavados orales y el análisis de la microbiota oral, y ambos tipos de enjuague bucal fueron estables sin congelación durante 10,0 días antes del procesamiento.
La propiedad antimicrobiana del cloruro de cetilpiridinio, presente en ambos tipos de enjuagues bucales, probablemente inhibió el crecimiento bacteriano en los lavados bucales muestreados, confiriendo una alta estabilidad a los enjuagues bucales durante las demoras en el procesamiento.
Los rendimientos medios de ADN para los enjuagues bucales con y sin etanol fueron de 1.803,0 ng y 1.343,0 ng, respectivamente. Los rendimientos medios de ADN para muestras procesadas inmediatamente, almacenadas durante cinco días y almacenadas durante diez días fueron 1517,0 ng, 1636,0 ng y 1539,0 ng, respectivamente. Los rendimientos medios de ADN en el primer y segundo día de la recolección de la muestra fueron de 1375 ng y 1723 ng, respectivamente.
Se observaron diferencias significativas con respecto a las variantes de secuencia de amplicón (ASV) entre los dos tipos de enjuague bucal; la mediana de ASV para enjuagues bucales sin etanol y con etanol fue de 116 y 124, respectivamente.
Los valores medianos del índice de Shannon en las muestras correspondientes fueron 4,46 y 4,50, respectivamente. Sin embargo, los valores de diversidad filogenética (DP) de Faith para los dos tipos de enjuagues bucales no difirieron significativamente. Se observaron hallazgos similares para las muestras almacenadas durante diez días antes del procesamiento.
Según los hallazgos del estudio, los enjuagues bucales sin etanol son apropiados para obtener y transportar muestras de lavado bucal para analizar la microbiota bucal.
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