Què és un microscopi de fluorescència?

La creació dels microscopis va significar un avenç important per a la ciència i per als diversos estudis que es van realitzar dins de la branca posteriorment. Des del seu sorgiment, han estat els diferents tipus d'aparells que s'han vist, com ara el microscopi de fluorescència. Per conèixer-ne més, continua llegint aquest article.

És una variant del microscopi de llum ultraviolada on els objectes que s'observen són il·luminats amb raigs de longitud d'ona, mostren una imatge amb radiació electromagnètica que emeten les mateixes molècules que van absorbir aquests raigs i els reemeten amb una llum més gran en longitud d'ona.

La imatge posteriorment surt visualitzada amb una emissió secundària, col·locant filtres adequats sota el condensador i per sobre de l'objectiu. Aquests microscopis es fan servir per ubicar substàncies que tinguin autofluorescència com és el cas de la vitamina A i dels fluorocroms.

A més la fluorescència té una vida molt curta per les molècules dels fluorocroms i fluoròfors. Els primers són molècules que poden absorbir i emetre els fotons amb més longitud d'ona, i els segons són una part del fluorocrom que pot emetre la fluorescència.

Aquest fenomen físic s'ocasiona quan hi ha un electró d'un àtom capaç d'absorbir l'energia d'una longitud d'ona determinada, portant-la a un estat d'exaltació, per després passar novament al vostre estat orbital.

Un microscopi de Fluorescència requereix tenir una font de llum, filtres i objectius, aquests han de tenir en compte quin tipus d'òptica necessita, i també quin tipus de disseny òptic necessita per fer correccions a l'infinit, longitud finita, etc. /p>

Microscopi d'epifluorescència

Aquesta és una variant del microscopi de fluorescència, on a un microscopi tradicional  se li acobla o adjunta la fluorescència, inserint-la per sobre del seu sistema òptic o lents d'augment i treballa per la reflexió de la llum.

Un microscopi de tipus òptic ha de tenir algun element essencial per ser usat en treballs analítics amb fluorescència, han de posseir objectius (lents) que puguin transmetre bé la llum, la majoria de les lents es fabriquen amb fluorita, per a alguns casos, aquests tenen un cost més elevat que les lents convencionals.

Però a més, també compten amb una millor definició o obertura numèrica, encara que aquest punt no és necessàriament imprescindible per fer diagnòstics. És per això que l'accessori de fluorescència és complementari al sistema de il·luminació.

Components del microscopi d'epifluorescència

Aquest microscopi ha de tenir una font elèctrica perquè funcioni, un porta-làmpada que tingui inclòs el llum de vapor de mercuri, que és millor que un llum halògen o de tipus led, un sistema que serveixi per col·lectar la llum i els filtres específics de fluorescència.

Font d'alimentació elèctrica: ha de tenir un transformador de tipus independent que es pugui alimentar del llum i posseir un comptador d'hora per verificar-ne el funcionament, pel fet que tenen una curta durada, per això les seves emissions es van esgotant entre 200 a 300 hores d'ús.

Portalàmpades: és la que ha de contenir el llum de vapor de mercuri, aquest s'usa en espais amb ventilació perquè desprèn molta calor, a més, ha de tenir una protecció tèrmica per evitar cremades i un sistema de centrat de llum de tres eixos.

Làmpada de Vapor de Mercuri: ha de ser d'alta pressió, aquesta produeix un arc d'electricitat incandescent als pols, positiu i negatiu, i allà és on es concentraran les molècules de gas de mercuri , perquè es produeixi la llum blanca de molta intensitat que es col·locarà damunt de la mostra al microscopi.

Aquesta llum que emet és la que es canalitza a través del sistema col·lector de la llum i seleccionarà el feix de la mateixa perquè arribi als filtres Aquests en general s'insereixen en blocs o suports plans.

>

Els filtres que es fan servir poden ser d'excitació, de divisió de raigs dicroics o d'emissió. El primer pot seleccionar longituds d'ona que fan que un fluoròfor en particular es faci present en una mostra. Els filtres d'emissió tenen la funció d'actuar com a control de qualitat.

El mirall dicroic té per funció reflectir la llum a la banda d'excitació i que aquesta després es transmeti a la banda d'emissió, cosa que fa que funcioni la il·luminació clàssica de la llum en la forma de l'epifluorescència.

Com funcionen els microscopis de fluorescència?

Funcionen a través de la Llei de Stokes i els filtres de fluorescència. En un microscopi tradicional la il·luminació deixa veure una mostra a través de la transmissió de la llum que travessa aquesta, la qual recull la imatge en l'objectiu i aquesta es pot augmentar a través de l'ocular per visualitzar-la.

En un microscopi de fluorescència es pot veure la mostra per la reflexió de la llum, és a dir que la llum es va portant des del llum de vapor de mercuri fins al sistema que col·lecta la llum i d'allà a l'objectiu d'augment o lent ajudant que la llum es concentri a la mostra.

Un cop allà, fa que aquesta es pugui reflectir en una longitud d'ona més ampla però que tingui menys energia. La llei de Stokes és una llei física que indica que quan s'il·lumina un objecte amb una llum blanca, el color que té l'objecte es veurà més reflectit.

Si la mostra té un color verd, aquest absorbirà les longituds d'ona i la reflectirà en l'esmentat color, si l'objecte és negre, absorbeix totes les longituds d'ona i si és blanc, aquest tendeix a reflectir totes les ones.

S'utilitzen en microscòpia biològica i analítica, pel seu alt grau de sensibilitat i perquè són específics, permetent a l'usuari determinar un sol tipus de molècula, determinar com es concentren els ions i també com funcionen els processos intra i extracel·lulars com la endocitosi i l'exocitosi.

 

.

Deixar un comentari

Si us plau tingueu en compte que els comentaris han de ser aprovats abans de ser publicats